蔗糖飞溅测试(Sucrose Splash Test,SST)是一种用于评估啮齿动物的动机缺乏和抑郁样行为的实验方法,特别是其自我护理和维持身体整洁的意愿。 此测试特别适用于检测抗抑郁药物(尤其是那些针对动机和活动性的药物)的疗效。它提供了一个简单、快速且无需昂贵设备的方法来评估抑郁样行为。
实验原理
当一只健康的小鼠身上被喷上粘稠的液体(如蔗糖水)时,它会立即开始积极地梳理毛发,清理身体。然而,处于抑郁状态的小鼠,其动机和活动性会下降,表现为启动梳理行为的延迟时间变长,以及在整个测试期间总的梳理时间缩短。
实验步骤
实验前准备
1、实验动物:按照国家实验动物质量标准的规定选择小鼠,并通过实验要求对小鼠进行相应的处理并单独饲养。
2、标准实验室条件:12小时光/暗循环,08:00至20:00开灯;温度= 22±2°C;湿度= 50%±10%。
3、自由获取食物和水。
预测试准
1.准备150ml 10%的蔗糖溶液,并将该溶液装入雾化喷雾瓶中;
在开阔场地放置一个浅色的小盒子或透明观察笼用于测试,并将测试盒的底部用胶带固定好,以确保稳定性;
在测试前准备好动物行为分析软件以及配套的相机,调整距离、角度、焦距等,确保拍摄到的画面清晰无歪斜;
TOP-Cage
(笼内精细行为分析)
拉夫海思;LH1401型
TOP-BEHAV3D
(动物3D行为分析)
拉夫海思;LH1400型
4. 调整环境灯光。关闭房间内干扰灯光,打开调整用补光灯/红外光源;
5. 提前30-60分钟将小鼠转移至行为实验室,避免应激。
Protocol
1、习惯化试验。 将实验动物放置在测试箱内,启动行为分析软件并计时五分钟,任其自由活动,完成适应后返回饲养笼内。
2、喷洒蔗糖溶液。 使用喷雾瓶,用配置好的蔗糖溶液喷洒在小鼠背部毛发上(亦有实验将蔗糖溶液用棉签涂抹在腹部毛发上),喷洒两次,尽量保证每只小鼠喷洒的部位一致。
3、测试。 将喷洒好的动物放入测试箱内,实验人员迅速撤离实验区域,小鼠的毛发在被粘稠的蔗糖溶液弄脏后,会开始进行自我清洁,即理毛行为。启动行为分析软件记录并计时五分钟。
4、清洁动物。 计时结束后,实验人员将动物取出,用湿毛巾擦拭动物的皮毛。
5、清洁测试区域。 在下只动物测试之前,用酒精或其他清洁剂擦拭测试箱,避免污渍及气味残留。
6、数据记录。使用行为分析软件进行行为分析及参数计算,如首次梳理行为的潜伏期、梳理持续总时间及梳理频率。潜伏期延长、梳理时间变短及梳理频率降低均提示实验动物当下的抑郁状态。
注意事项
【溶液】
蔗糖溶液浓度不同,黏度就不同。需确保每次配置方法一致。
蔗糖水容易滋生微生物。建议每次实验前都使用新的、新鲜配制的溶液,以避免细菌污染引起小鼠不必要的炎症或不适。
【操作】
>装置:使用同一个喷雾瓶,并在喷洒前检查喷洒口有无异常。
>喷洒量:通常在小鼠肩胛骨之间的背部区域,喷洒固定次数(如2下),确保足以浸湿一块固定大小的皮毛区域,但不能多到让液体流淌下来。
>位置:始终喷在背部同一区域,避免喷到头部、眼睛或耳朵,这会引起小鼠剧烈的逃避行为而非梳理行为。
【环境】
保持安静、光线恒定、无气味干扰。
所有实验在每天小鼠的活动期(黑暗期)的固定时间段内进行
【记录】
尽量采用行为分析软件进行记录,调整好阈值,保证计时的准确性及梳理行为识别标准的客观一致性。
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